qPCR 反应体系计算器 | 医研AI工具库

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实验参数设置

待鉴定样本数量

需要上qPCR的样本数量

增益数量（余量）

约20%余量，补偿移液损失

SYBR Green 法

TaqMan 探针法

📌 计算说明：

总反应数 = 待鉴定样本数量 + 增益数量
增益用途：补偿移液损失、设置复孔、阴性对照（NTC）
分装策略：引物分别配制（分装管1：正向引物，分装管2：反向引物）

📋

单孔反应体系（20 μL）

组分	单样体积 (μL)	说明
2×SYBR Green qPCR Mix	10.0	预混液（含染料、dNTP、酶）
Nuclease-free Water	4.2	补足体积
正向引物 (F)	0.4	10 μM 储存液，终浓度 0.2 μM
反向引物 (R)	0.4	10 μM 储存液，终浓度 0.2 μM
Mix 小计	15.0	提前配制，分装到PCR板
DNA/cDNA 模板	5.0	上样时加入
总体系	20.0

💡 实验注意事项：

引物浓度：表格按10 μM储存液设计，终浓度0.2 μM（标准范围0.2-0.5 μM）
模板量：基因组DNA建议10-100 ng，cDNA建议1-100 ng
配制顺序：先配Mix（不含模板），分装后最后加入模板
分装策略：引物分别配制可避免交叉污染，便于多基因检测

📊

配制计算结果

✅ 总反应数

16

个反应

分装管1总体积（正向引物 Mix）

6.4

μL

分装管2总体积（反向引物 Mix）

6.4

μL

SYBR Green Mix 总体积

160

μL

Nuclease-free Water 总体积

67.2

μL

组分	单样体积 (μL)	总体积 (μL)	说明

📝 配制步骤：

准备2个1.5 mL离心管（分装管1和分装管2）
分装管1：加入 μL 2×SYBR Green Mix + μL Water，混匀
分装管2：加入 μL 2×SYBR Green Mix + μL Water，混匀
分别向两个管中加入 μL 对应引物，混匀
将 Mix 分装到PCR板中，每孔 15 μL
最后向每孔加入 5 μL DNA/cDNA 模板

⚠️ 重要提示：

冰上操作：所有试剂配制建议在冰上进行
充分混匀：配制后轻柔吹打8-10次，短暂离心
避免气泡：分装时避免产生气泡，影响qPCR准确性
引物分装：正向和反向引物分别配制，便于多基因实验

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